Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:50 мин. • April 30th, 2023
Фосфорилирование специфических аминокислотных остатков, таких как тирозин, генерирует фосфопептиды, которые играют важную роль в регулировании нескольких клеточных сигнальных путей. Их изучение позволяет выявить потенциальные биомаркеры для терапии рака.
Чтобы выделить фосфопептиды, начните с лиофилизированного порошка очищенных пептидных расщеплений, извлеченных из раковой ткани. Повторно суспендируйте порошок в подходящем буфере, чтобы получить однородную пептидную суспензию. Поддерживайте нейтральный pH для обеспечения стабильности пептидов.
Приготовьте суспензию, состоящую из гидрогелевых шариков, конъюгированных со специфическими антифосфопептидными антителами в нужном буфере. Добавьте суспензию в гранулы пептидной суспензии. Антитела, иммобилизованные на шариках, распознают и связываются со своими специфическими фосфорилированными аминокислотными остатками внутри фосфопептидов, образуя комплексы.
Центрифугой смеси собрать фосфопептидно-шариковые комплексы в гранулы. Удалите надосадочную жидкость, содержащую несвязанные пептиды или неспецифические фосфопептиды. Добавьте в комплексы подходящий буфер для элюирования с низким pH и инкубируйте. Низкий pH ослабляет взаимодействие м
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео