Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:36 мин. • April 30th, 2023
Метилирование ДНК включает в себя добавление метильных групп к цитозиновым остаткам ДНК с образованием метилцитозина, вызывающего изменение ДНК и регуляцию экспрессии генов.
Чтобы изучить метилирование ДНК, начните со взятия сырого экстракта ДНК из раковых клеток. Добавьте буфер для разведения и инкубируйте при комнатной температуре. Буфер разбавляет смесь и денатурирует двухцепочечную ДНК в одноцепочечную ДНК, способствуя доступности оснований для последующих реакций.
Добавьте конверсионный реагент и инкубируйте в темноте. Бисульфит натрия в составе реагента запускает сульфирование и последующее дезаминирование неметилированных остатков цитозина, что приводит к образованию урацил-сульфоната. Однако метилированные остатки цитозина остаются неизменными.
Далее дополните ДНК связывающим буфером и перенесите его в предварительно собранную колонку со спиновым фильтром. Буфер помогает ДНК связываться с фильтром.
Центрифуга для удаления буферной и бисульфитной смеси реагентов из захваченной ДНК в колонке. Откажитесь от проточного потока. Добавьте в ДНК щелочной буфер для десульфирования. Буфер способствует удалению сульфитной группы из урацил-сульфоната с образованием урацила.
Центрифуга
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео