Окрашивание срезов предметных стекол эластичными волокнами: методика наблюдения за метастазированием рака желудка

Окрашивание эластичными волокнами помогает исследовать инвазию раковых клеток за пределы перитонеальной эластической пластинки или субмезотелиальной эластической ткани.

Для начала добавьте раствор марганцовки на обработанный участок ткани с последующим погружением в щавелевую кислоту. Сильная окислительная способность комбинации перманганата калия и щавелевой кислоты отбеливает естественный пигмент из участка ткани, предотвращая вмешательство в процесс окрашивания путем искажения морфологии эластичных волокон.

Промойте предметное стекло водой с этанолом, чтобы удалить остатки отбеливающего средства. Затем инкубируйте образец в эластиновом красителе, который содержит железо-гематоксилиновый комплекс. Эластин, основной компонент эластических волокон, обладает сильным сродством к железо-гематоксилиновым комплексам.

Промойте предметное стекло этанолом и водой, чтобы удалить остатки пятен. Наконец, обработайте образец противоморочным пятном, содержащим пикриновую кислоту и Ponceau S. Более мелкие молекулы пикриновой кислоты проникают во все типы тканей, но прочно удерживаются плотно структурированными мышечными и раковыми клетками. Напротив, более крупные молекулы Ponceau S вытесняют пикриновую кислоту в коллагене с пористой текстурой, в результате чего коллаген окрашивается иначе, чем мышечные и раковые клетки.

При наблюдении под микроскопом эластичные волокна выглядят как иссиня-черные нити. Коллаген окрашивается в красный цвет, в то время как мышечные и раковые клетки становятся желтыми. Желтые раковые клетки, проникающие через сине-черную эластичную пластинку, подтверждают метастатическую инвазию.

Во-первых, с помощью папиросной бумаги вытрите излишки раствора на предметном стекле или вокруг ткани. Размещайте горки в условиях, соответствующих комнатной температуре и влажности. Добавьте несколько капель марганцовки в каждое предметное стекло, чтобы окислить их, убедившись, что добавленного объема достаточно, чтобы покрыть участок ткани на каждом предметном стекле. Через 5 минут промойте окисленные стекла дистиллированной водой в банках Coplin, повторяя полоскание два-три раза, и используя новую банку воды для каждого полоскания. Ткань должна иметь заметный коричневый цвет.

Теперь добавьте несколько капель щавелевой кислоты на каждое предметное стекло, чтобы отбелить их, убедившись, что добавленного объема достаточно, чтобы покрыть участок ткани на каждом предметном стекле. Через 5 минут промойте отбеливающие стекла дистиллированной водой, повторяя полоскание два-три раза, и используя новую банку воды для каждого полоскания. Кратковременно вымойте горки в 95% спирте.

Погрузите вымытые предметные стекла в раствор эластина на 8 – 24 часа. Затем погрузите предметные стекла непосредственно в 95% этанол на 1-2 минуты, чтобы хорошо дифференцировать каждый участок ткани. Полностью промойте горки дистиллированной водой.

Проверьте под микроскопом на наличие сине-черного окрашивания эластичных волокон и серого фона. Лучше немного недодифференцировать ткань, так как последующее противопятно Ван Гисона также может в некоторой степени извлечь эластичное пятно.

Закрасьте предметные стекла раствором Ван Гисона в течение 1 минуты, убедившись, что используемого объема достаточно, чтобы полностью покрыть участок ткани на каждом предметном стекле. Затем быстро капните 95% этанола на срезы тканей на несколько секунд, чтобы хорошо дифференцировать каждый участок ткани.