Флуоресцентная микроскопия внеклеточных ловушек нейтрофилов или НВЛ: метод наблюдения адгезивного взаимодействия между раковыми клетками и НВЛ

При патологических состояниях, таких как рак, активированные нейтрофилы высвобождают нейтрофильные внеклеточные ловушки или НЭО – сетку внеклеточной ДНК с соответствующими ферментами и антимикробными белками, которые захватывают циркулирующие раковые клетки.

Чтобы визуализировать адгезивное взаимодействие между НВЛ и опухолевыми клетками in vitro, начните с культивирования нейтрофилов низкой плотности, подтипа нейтрофилов, в чашке для культур, покрытой полимером, которая способствует прикреплению клеток. Инкубируйте в течение нескольких часов, чтобы стимулировать нейтрофилы к образованию паутинных НВЛ.

Добавьте в культуру нейтрофилов суспензию красных меченых флуоресцеином раковых клеток. Инкубируйте раковые клетки с НВЛ в течение короткого периода времени, чтобы облегчить взаимодействие раковых клеток с НВЛ. ДНК НВЛ действует как хемотаксический фактор, привлекающий раковые клетки и способствующий их адгезии к НВЛ.

Удалите отработанное средство. Аккуратно промойте культуру подходящей свежей средой, чтобы хорошо удалить любые неприкрепленные опухолевые клетки из культуры.

Теперь добавьте непроницаемый для мембраны зеленый флуоресцентный ядерный краситель, чтобы избирательно окрашив