Подготовка экзосом: протокол сохранения экзосом из культивируемых клеток рака толстой кишки человека

Экзосомы — это внеклеточные везикулярные структуры, которые секретируются культивируемыми клетками в надосадочную жидкость. Чтобы приготовить экзосомный блок, начните с приема в пробирку экзосомного супернатанта культуры. Центрифугируйте пробирку на высокой скорости, чтобы гранулировать неповрежденные экзосомы. Выбросьте оставшуюся надосадочную жидкость.

Обработайте гранулу экзосомы глутаральдегидом, присутствующим в фиксирующем буфере. Инкубируйте смесь на льду в течение желаемого времени, чтобы сохранить морфологию экзосом. Глутаральдегид проникает в экзосомы и сшивает белки. Фиксирующий буфер поддерживает нейтральный pH экзосом для последующего процесса фиксации.

Откажитесь от глутаральдегидсодержащего буфера и добавьте раствор тетраоксида осмия - вторичный фиксатор, который пронизывает мембранный бислой и фиксирует липиды, присутствующие в экзосомах. Удалите раствор тетраоксида осмия и обработайте экзосомы рядом увеличивающихся концентраций ацетона. Этот процесс обезвоживает экзосомы.

Замените абсолютный ацетон смесью срединно-ацетоновой среды. Постепенно увеличивайте соотношение заделочной среды в этой смеси.

Разлейте закладочную смесь, содержащую экзосомы, в нужные формы. Выс