Иммуноокрашивание экзосомальных срезов золотом: методика визуализации диагностических маркеров в экзосомальном просвете

Экзосомы представляют собой небольшие внеклеточные везикулы, содержащие различные биомолекулы, которые служат биомаркерами рака.

Чтобы визуализировать экзосомальные биомаркеры, начните с ультратонких экзосомальных срезов, встроенных в смолу, поддерживаемых подходящими металлическими сетками электронной микроскопии. Инкубируйте сетки в каплях глицина. Глицин связывает и нейтрализует реакционноспособные альдегидные группы в срезах, преодолевая их интерференцию с анализом.

Промойте образец водой, чтобы удалить остатки реагентов. Впоследствии инкубируйте образец в блокирующем буфере. Буфер содержит сывороточные белки, которые блокируют неспецифические сайты связывания антител в образце.

Далее инкубируйте образец в нужном первичном растворе антитела. Эти антитела распознают и связываются со своими мишенями биомаркерами, локализованными в экзосомальном просвете. Смойте все несвязанные антитела подходящим буфером.

Теперь перенесите сетки с образцами в капли, содержащие конъюгированные с золотом вторичные антитела, которые прикрепляются к первичным антителам. Наночастицы золота служат электронно-плотными маркерами для визуализации тонкой локализации молекул-мишеней. Смойте все несвязанные