Иммуноокрашивание экзосомальных срезов золотом: методика визуализации диагностических маркеров в экзосомальном просвете

0 просмотров3:36 мин • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Экзосомы представляют собой небольшие внеклеточные везикулы, содержащие различные биомолекулы, которые служат биомаркерами рака.

Чтобы визуализировать экзосомальные биомаркеры, начните с ультратонких экзосомальных срезов, встроенных в смолу, поддерживаемых подходящими металлическими сетками электронной микроскопии. Инкубируйте сетки в каплях глицина. Глицин связывает и нейтрализует реакционноспособные альдегидные группы в срезах, преодолевая их интерференцию с анализом.

Промойте образец водой, чтобы удалить остатки реагентов. Впоследствии инкубируйте образец в блокирующем буфере. Буфер содержит сывороточные белки, которые блокируют неспецифические сайты связывания антител в образце.

Далее инкубируйте образец в нужном первичном растворе антитела. Эти антитела распознают и связываются со своими мишенями биомаркерами, локализованными в экзосомальном просвете. Смойте все несвязанные антитела подходящим буфером.

Теперь перенесите сетки с образцами в капли, содержащие конъюгированные с золотом вторичные антитела, которые прикрепляются к первичным антителам. Наночастицы золота служат электронно-плотными маркерами для визуализации тонкой локализации молекул-мишеней. Смойте все несвязанные вторичные антитела подходящим буфером.

Наконец, в темных условиях постоянно инкубируйте сетки в растворах уранилацетата и цитрата свинца. Эти реагенты тяжелых металлов окрашивают и усиливают контраст органических молекул, таких как липиды, белки и гликогены, в образце, дифференцируя их от фона.

Рассмотрите окрашенные срезы под просвечивающим электронным микроскопом. Помеченные золотом биомаркеры проявляются в виде темных частиц в просвете экзосомных структур, окрашенных тяжелыми металлами.

Для начала инкубируйте сетки, содержащие неокрашенные срезы толщиной 60 нанометров, в каплях 0,02 М глицина по 50 микролитров в течение 10 минут, чтобы погасить свободные альдегидные группы. Затем промойте срезы в 100 микролитрах дистиллированной воды три раза по 10 минут каждая. После последнего промывки инкубируйте секции в течение 1 часа при комнатной температуре в PBS, содержащем 1% BSA. Затем инкубируйте сетки в каплях от 50 до 100 микролитров антитела против KRS в течение 1 часа.

Далее промойте сетки пять раз по 10 минут каждая в капле PBS, содержащей 0,1% BSA. Затем перенесите в сетки каплю соответствующего вторичного антитела и инкубируйте срезы в течение 1 часа при комнатной температуре. Теперь промойте решетки пять раз в течение 10 минут каждый отдельной каплей PBS, содержащей 0,1% BSA. Дважды окрашивайте срезы 2% уранилацетатом в течение 20 минут в темноте, а затем вводите цитрат свинца Рейнольдса в течение 10 минут. Поместите окрашенный срез в просвечивающий электронный микроскоп и просмотрите образец с помощью напряжения 80 кВ и сделайте его изображение с помощью программного обеспечения микроскопа.

11:38

Инновационный метод для экзосома количественной и измерения размера

Похожие видео

0 Просмотры

09:43

Упрощенный нейтрофилов человека Внеклеточные Ловушки (НРТ) Изоляция и регулировать

Похожие видео

0 Просмотры

13:45

Оценка функции внеклеточного пузырьков во время инфекции малярии

Похожие видео

0 Просмотры

09:43

Выделение и характеристика РНК-содержащих экзосом

Похожие видео

0 Просмотры

09:49

Нанозолото Маркировка из дрожжей эндосомных системы для Ультраструктурные Анализы

Похожие видео

0 Просмотры

09:24

Высокое разрешение Количественный Immunogold Анализ мембранными рецепторами на сетчатки синапсах ленточного

Похожие видео

0 Просмотры

08:49

Exosomal микроРНК Анализ в немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) Плазменный Пациентов Через кПЦР: посильная Liquid Биопсия Tool

Похожие видео

0 Просмотры

11:15

Подготовка образцов и изображений Exosomes, просвечивающей электронной микроскопии

Похожие видео

0 Просмотры

09:16

Быстрое на основе флуоресценции характеристика одной внеклеточного везикулы в крови человека с анализом наночастиц отслеживание

Похожие видео

0 Просмотры

09:30

Использование Наноплазмона-усиленного рассеяния и Низкоувеличенного микроскопа визуализации для количественной оценки опухоли-производные Exosomes

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026