Негативное окрашивание очищенных экзосом: процедура визуализации морфологии экзосом с помощью просвечивающей электронной микроскопии

Для выполнения негативного окрашивания экзосом - наноразмерных, сферических везикул - начните с взятия подходящей сетки электронной микроскопии. Подготовьте сетку с помощью разрядника накаливания. Этот процесс делает поверхность сетки гидрофильной для лучшей адгезии образцов.

Одновременно берут в пробирку суспензию очищенных экзосом. Дополните пробирку параформальдегидом - фиксатором образца - и инкубируйте. Параформальдегид проникает в экзосомы и сшивает белки и нуклеиновые кислоты. Этот шаг жизненно важен для сохранения морфологии экзосом.

Теперь загрузите суспензию экзосом на заранее подготовленную решетку и инкубируйте, чтобы произошла адсорбция. Далее добавьте несколько капель уранилацетата, красителя тяжелого металла, поверх сетки. Ионы уранила связываются с мембранными белками и липидами, образуя отложения вокруг границы экзосомы.

В последнюю очередь постирайте сетку в воде, чтобы удалить лишнее пятно. Дайте сетке высохнуть и получите изображение с помощью просвечивающей электронной микроскопии или ПЭМ.

Когда электронный луч ударяется об экзосомы, пятно, окружающее образец, рассеивает больше электронов. Экзосомы, будучи менее электронно-плотными, пропускают пучок. Эти по-раз