Мгновенная заморозка мышечной ткани для разреза: протокол получения ультратонких срезов быстро замороженной мышечной ткани мыши

Мгновенная заморозка — это метод, при котором образцы тканей быстро замораживаются до сверхнизких температур. Он помогает сохранить нативную структуру ДНК, РНК и белков внутри ткани.

Чтобы быстро заморозить мышцу конечности, начните со взятия только что извлеченной мышечной ткани из задней конечности мыши.

Далее возьмите жидкий азот в пенопластовую коробку и погрузите стакан, содержащий изопентан – жидкость с высокой проводимостью – в жидкий азот.

Заморозьте изопентан до тех пор, пока раствор не станет вязким. Одновременно нанесите каплю жидкого замораживающего материала поверх куска пробки.

Расположите мышечную ткань задней конечности, удерживая ее сухожилие, и вертикально вставьте кусочек ткани в жидкую среду для замораживания. Такая ориентация помогает в последующем определении площади поперечного сечения мышцы.

Ненадолго погрузите кусок пробки с прикрепленной мышечной тканью в предварительно охлажденную ванну с изопентаном. Это способствует быстрому и равномерному замораживанию мышечной ткани.

Замораживающая среда застывает при низкой температуре и образует студенистый слой вокруг мышечной ткани, удерживая ее на месте. Поместите мышечный блок в криомикротом, чтобы получить тонк