Приготовление цельной горы из кишечника мыши: использование простого устройства для разреза кишечника для приготовления целой горки

Цельномонтовый анализ позволяет визуализировать многомерные поперечные сечения тканей, сохраняя при этом структурные взаимодействия между клетками и их микроокружением.

Чтобы приготовить целые горы кишечника, начните со свежесобранного кишечника мыши. Удалите брыжейку – складки брюшинной ткани – из кишечника. Промойте кишечник охлажденным буфером, чтобы удалить любые каловые массы.

Далее удалите слепую кишку. Рассеките кишечник на равные сегменты. Сделайте небольшие надрезы в кишечных сегментах, чтобы отвести из них жидкость.

Аккуратно введите влажный стержень из нержавеющей стали в кишечные сегменты. Теперь поместите эти стержни в пазы для удержания в основании специального устройства для надрезания кишечника. Наденьте крышку устройства на его основание.

Используя в качестве ориентира скошенные бруски на крышке, продольно надрежьте сегменты кишечника. Снимите крышку с устройства. Смочите сегменты. Аккуратно покатайте стержень в сторону, чтобы освободить и развести сегменты плашмя.

Погрузите сегменты в ванну, содержащую подходящий фиксатор, и инкубируйте в течение желаемого времени. Фиксатор химически сохраняет клеточную структуру и архитектуру тканей для последующего забора проб.

После фиксации храните ткань в этаноле до дальнейшего анализа.

Для этой процедуры используется устройство, состоящее из основания, которое имеет высокие приподнятые полосы на каждом конце с пазами для захвата стержней и крышки. После забора тонкой кишки и толстой кишки у взрослой мыши придерживайте брыжейку изогнутыми щипцами и аккуратно оттягивайте ткань от кишечника, чтобы удалить ее. Поместите наконечник пипетки типа Жильсона, обрезанный на более широком конце, на пластиковый шприц объемом 10 или 20 миллилитров люэра и промойте кишечник холодным PBS.

После того, как ткань будет промыта, разложите тонкую кишку и толстую кишку на бумажном полотенце и с помощью ножниц разделите тонкую кишку на три равные части. Сделайте несколько очень маленьких надрезов в кишечных сегментах, чтобы слить жидкость. Затем положите на кишечник еще одно бумажное полотенце и аккуратно проведите пальцем по сегментам, чтобы выдавить оставшуюся жидкость.

Далее промокните препараты насухо и аккуратно введите в ткани стержни из нержавеющей стали, смоченные в PBS. С помощью карандаша создайте метки для сегментов, включая дату вскрытия, экспериментальный код и идентификационный номер животного. Поместите этикетки в основание устройства. Затем вставьте стержни и кишки в пазы в основании устройства, следя за тем, чтобы проксимальный конец сегментов был расположен стандартизированным образом рядом с этикетками.

Теперь поместите верхнюю часть устройства над основанием и с помощью наклонных стержней проведите лезвие скальпеля в продольном направлении через сегменты. Чтобы удержать ткань на месте во время разрезания, тщательно придерживайте сегменты пальцем, чтобы они не двигались вместе с ножом.

После того, как все секции будут сделаны, снимите верхнюю часть устройства и с помощью куска жесткой карты осторожно удалите фильтровальную бумагу и салфетки. С помощью подушечки пальца в перчатке, смоченной в PBS, слегка намочите сегменты. Аккуратно прокатывайте стержень, из стороны в сторону, чтобы открыть кишечник и раздвинуть ткань ровно.

Секции будут прилипать к фильтровальной бумаге. После визуального осмотра препаратов на предмет каких-либо грубых поражений, перенесите фильтровальную бумагу в неглубокую ванну с фиксатором. Когда ткани будут зафиксированы, переведите их в 70% этанол для хранения до дальнейшего анализа.