Выделение мононуклеарных клеток Lamina Propria: метод центрифугирования на основе градиента плотности на основе диоксида кремния для получения мононуклеарных клеток из толстой кишки мышей

Собственная пластинка кишечника, расположенная ниже кишечного эпителия, состоит из рыхлой соединительной ткани вместе с плотной сетью коллагеновых волокон, содержащих разнообразный набор клеток, таких как фибробласты, мононуклеарные клетки, включая лимфоциты и моноциты. Эти клетки играют решающую роль в поддержании гомеостаза.

Чтобы выделить мононуклеарные клетки, начните с взятия фрагментов толстой кишки мыши. Обработайте фрагменты буфером для пищеварения, содержащим ферменты коллагеназы. Ферменты коллагеназы переваривают коллагеновые волокна в тканях, высвобождая клетки в виде суспензии.

Соберите надосадочную жидкость и отфильтруйте ее через клеточные фильтры, чтобы удалить непереваренную ткань и мусор и получить одноклеточную суспензию. Добавьте охлажденный буфер к фильтрату для инактивации ферментов коллагеназы.

Центрифуга для разделения ячеек. Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую ферменты, и повторно суспендируйте клеточную гранулу в разделительной среде на основе диоксида кремния низкой плотности. Затем нанесите слой суспензии на разделительный материал на основе диоксида кремния высокой плотности, чтобы создать градиент разделения.

Центрифугируйте смесь. Мононуклеарны