Выделение фундальных желез желудка: метод выделения фундальных желез из тканей желудка человека

У человека глазное дно является самой верхней частью желудка. Фундальный эпителий состоит из многочисленных желудочных желез, которые выделяют желудочный сок, способствующий пищеварению.

Чтобы изолировать дальные железы желудка, начните с забора фундальной ткани человека в стакан. Добавьте подходящий буфер в стакан и энергично промойте фундальную ткань. Промывание удаляет загрязняющий мусор и кровь с фундальной ткани.

Переложите чистую салфетку в тарелку Петри. С помощью стерильной марли протрите защитный слой слизистой, обнажив таким образом нижележащий эпителиальный слой. С помощью щипцов с силой соскребите с ткани самый верхний эпителиальный слой.

Переложите соскобленный эпителий на другую пластину Петри и нарежьте его более мелкими кусочками. Добавьте измельченные кусочки в колбу, содержащую буфер с добавлением ферментов коллагеназы. Инкубируйте при нужной температуре при постоянном перемешивании, чтобы предотвратить образование комков.

Коллагеназа переваривает белки внеклеточного матрикса, присутствующие в эпителиальном слое, высвобождая диссоциированные фальные железы в суспензию. Отфильтруйте суспензию в свежую пробирку, чтобы удалить все недиссоциированные комки.

Держите железистый фильтрат в покое на льду, чтобы осадить железы. Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую клеточный мусор, и повторно суспендируйте железистый осадок в свежем буфере. Центрифугируйте и храните железистую гранулу до дальнейшего использования.

Для начала соберите подготовленную салфетку в большой пластиковый контейнер, наполненный DPBS, не содержащим кальция/магния. Оставьте пластиковый контейнер на льду до использования. Далее с помощью щипцов энергично промывайте ткань в стерильном стакане, содержащем 100 миллилитров DPBS, не содержащего кальция/магния, в течение примерно 30 секунд. Затем с помощью стерильной марли смыть слой слизи с эпителия.

Далее с помощью больших щипцов прочно удерживайте мышечный слой ткани. Затем с помощью больших изогнутых гемостатических щипцов соскребите эпителий с усилием. Соскобленный эпителий хранят в стерильной полистирольной чашке Петри. Чтобы оптимизировать переваривание тканей, измельчите эпителиальную ткань на фрагменты. Затем промойте ткань DPBS, не содержащим кальция/магния, с добавлением антибиотиков.

Умойтесь несколько раз, чтобы удалить кровь. Выбросьте стирку в стакан для отходов. Затем соберите промытые фрагменты эпителия в стеклянную колбу с круглым дном объемом 125 миллилитров с 25-миллилитровым перемешивающим стержнем и предварительно подогретой инкубационной средой. Собрав фрагменты ткани, запечатайте круглое дно колбы резиновой перегородкой. Затем введите спинномозговую иглу 20G в перегородки. Подключите септы к кислородному баллону с помощью резинового шланга.

Вставьте от 10 до 15 игл оттока в перегородку, чтобы предотвратить ее разрыв, а затем с помощью зажимов закрепите установку на кольцевой подставке. Затем включите отток кислорода на низкий уровень. После этого откалибруйте водяную баню при температуре 37 градусов Цельсия на тарелке для перемешивания в течение 30 – 45 минут. После калибровки поместите установку на водяную баню. После 15 минут инкубации проверьте наличие диссоциированных желез.

По истечении нужного времени инкубации добавьте в инкубационную среду 50 миллилитров предварительно подогретого DMEM/F-12 с помощью серологической пипетки. Далее полученную железистую смесь процедить через стерильную марлю в четыре 50-миллилитровые конические трубки. Затем инкубируйте фильтрат на льду в течение 15 минут. Это позволит железе осесть на дно конической трубки. С помощью серологической пипетки выведите 40 миллилитров надосадочной жидкости из верхней части железы суспензии.

Оставшиеся 10 миллилитров железы смеси ресуспендировать в 10 миллилитрах ДПБС с добавлением антибиотиков. Затем распределите всю смесь по 5-миллилитровым пробиркам для клеточных культур. Центрифугируйте пробирки при 65 x g в течение 5 минут при 4 градусах Цельсия. После центрифугирования осторожно удалить надосадочную жидкость.