Выделение колонии метастатических раковых клеток из куриного КАМ: процедура выделения раковых клеток из культур яиц без скорлупы

Хориоаллантоисная мембрана курицы или CAM представляет собой трехслойную мембрану, расположенную прямо под яичной скорлупой. Он состоит из наружной эктодермы, высокососудистой мезодермы и самой внутренней энтодермы.

Мезодерма CAM состоит из кровеносных сосудов, фибробластов и стромальных компонентов, что обеспечивает благоприятную среду для колонизации опухолевых клеток.

Чтобы изолировать колонизированные раковые клетки от CAM, начните с использования в чашке культуры яиц без скорлупы, предварительно введенной флуоресцентно мечеными раковыми клетками. Визуализируйте культуру яйцеклеток под флуоресцентным микроскопом. Локализируйте флуоресцентные и компактные колонии метастатического рака.

Аккуратно иссеките ткань CAM, содержащую представляющие интерес метастатические колонии. Перенесите исчерпанную ткань CAM в микроцентрифужную пробирку. Измельчите ткань на мелкие кусочки, чтобы сделать CAM доступным для ферментативного лечения на последующих этапах.

Дополните пробирку ферментом коллагеназой и инкубируйте. Коллагеназа разрушает коллагеновый белок в мезодерме CAM и инициирует диссоциацию колонии рака. Центрифугируйте суспензию для гранулирования раковых клеток, остатков ткани CAM и