Выделение и культивирование эпителиальных клеток языка мышей: процедура выделения и культивирования эпителиальных клеток языка на мышиной модели

Язык состоит из слоистого плоского эпителия и нижележащего слоя плотной соединительной ткани, называемого собственной пластинкой. Эпителий состоит из многослойных плоских эпителиальных клеток, которые обеспечивают защиту от механических воздействий.

Чтобы выделить эпителиальные клетки, начните со свежесобранного мышиного языка. Измельчите язык, чтобы получить более мелкие фрагменты ткани. Затем обработайте фрагменты индивидуальным коктейлем для пищеварения, содержащим коллагеназу, гиалуронидазу и ферменты дезоксирибонуклеазу.

Ферменты коллагеназа и гиалуронидаза переваривают внеклеточный матрикс, который удерживает ткань вместе, способствуя высвобождению отдельных клеток в суспензию. Дезоксирибонуклеаза разрушает любую свободную ДНК, высвобождаемую из лизированных клеток.

Добавьте в переваренный образец буфер, содержащий сыворотку, чтобы инактивировать ферменты, гидролизующие белки. Теперь отфильтруйте образец через клеточные фильтры, чтобы удалить любые непереваренные фрагменты тканей и мусор и получить одноклеточную суспензию эпителиальных клеток.

Центрифуга для разделения ячеек. Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую смесь для пищеварения. Повторно суспендируйте клеточную г