Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 2:36 мин. • April 30th, 2023
Во время ортотопической внутрислизистой инокуляции опухолевые клетки, соответствующие гистотипу слизистой ткани, доставляются в ткань слизистой оболочки животного-реципиента.
Для начала задержите мышь под наркозом за шею на хирургической платформе, чтобы облегчить доступ ко рту.
Приготовьте в шприце суспензию высокометастазирующих раковых клеток в охлажденной матрице базальной мембраны. Низкая температура препятствует затвердеванию суспензии.
Осторожно введите эту суспензию во внутреннюю щечную или щечную область мыши. Щечная область выстлана слизистой оболочкой щек, которая окружена сетью кровеносных и лимфатических сосудов.
Обеспечьте полную доставку суспензии раковых клеток и аккуратно втяните иглу. Дайте матрице затвердеть и вживите в нее клетки.
Дайте мыши восстановиться. В течение нескольких дней после инъекции в месте инъекции развивается первичная опухоль. В конечном счете, клетки этой опухоли с высоким метастатическим потенциалом могут перемещаться по лимфатической системе и экстравазироваться в лимфатические узлы.
Эти раковые клетки адаптируются к новому микроокружению и размножаются и создают метастатические колонии в лимфатических узлах.
Непосредственно перед инъекцией смешайте клетки в соотношении суспензии опухолевых клеток к матрице базальной мембраны 1 к 1 на льду. Загрузите один шприц объемом 0,5 миллилитра, оснащенный иглой 23G, со 100 микролитрами клеток на каждое животное-реципиент. Положите шприцы на лед и подтвердите отсутствие реакции на защемление пальца ноги у мыши, находящейся под наркозом.
Затем введите иглу в правую или левую щечную область через доступное открытое пространство по обе стороны рта, держа шприц параллельно щечной области, пока он находится внутри ротовой полости, чтобы облегчить инъекцию полного 100-микролитрового объема суспензии клеточного базального мембранного матрикса в течение 5 секунд. Удерживайте шприц на месте еще 5 секунд, чтобы убедиться, что весь материал был введен, прежде чем аккуратно извлечь шприц. Опухоли станут заметными примерно через неделю.