Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:53 мин. • April 30th, 2023
Предварительная обработка фиксированных формалином парафинов или срезов тканей с FFPE облегчает экспозицию нуклеиновых кислот и позволяет связывать меченые зонды с целевой последовательностью при последующей гибридизации in situ. Кроме того, предварительная обработка помогает поддерживать целостность нуклеиновых кислот в клетках и общую морфологию тканей.
Для начала возьмите предметное стекло с интересующим вас депарафинизированным и регидратированным срезом ткани FFPE. Обработайте ткани соответствующей концентрацией перекиси водорода и инкубируйте.
Перекись водорода необратимо инактивирует эндогенную пероксидазу, которая физиологически присутствует в клетках. Этот процесс блокировки исключает возможность появления неспецифических фоновых сигналов на последующих этапах гибридизации.
Затем погрузите участок ткани в нагретую ванну, содержащую соответствующий буфер для извлечения антигена. Инкубируйте в течение желаемой продолжительности. Высокая температура расщепляет фиксаторно-индуцированные химические сшивания в белках и нуклеиновых кислотах, подвергая незамаскированные эпитопы воздействию зондов во время последующего мечения.
Наконец, обработайте образец подходящим раствором прот
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео