Зондовая гибридизация и амплификация сигнала в РНК in situ Hybridization: метод обнаружения специфических последовательностей РНК в срезах тканей

Чтобы обнаружить определенную последовательность РНК в клетке, начните со взятия среза ткани на предметном стекле. Наложите на участок ткани подходящий буфер для гибридизации, содержащий целевые РНК-зонды.

Эти зонды представляют собой Z-образные молекулы РНК, имеющие участок распознавания мишени на одном конце и последовательность хвоста на другом. Распорный рычаг соединяет эти два конца.

Теперь инкубируйте горло в гибридизационной печи при оптимальной температуре. Z-образные РНК-зонды проникают в клетку и попарно гибридизуются с соответствующей последовательностью мРНК-мишени.

Выньте горку из духовки. Погрузите предметное стекло в моющий раствор, чтобы удалить все несвязанные зонды и излишки буфера для гибридизации.

После этого добавьте раствор предварительного усилителя и инкубируйте. Молекула предусилителя прикрепляется к хвостовой последовательности двух соседних Z-зондов. Эта молекула не связывается с одним Z-зондом, что обеспечивает специфичность.

Далее добавьте в усилитель реагентную смесь и инкубируйте. Несколько молекул амплификатора гибридизуются с одной последовательностью предусилителя.

Наконец, пометьте участок ткани нужными зондами для мечения, чтобы обнаружить присут