Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 2:42 мин. • April 30th, 2023
Чтобы обнаружить хромогенные сигналы во время РНК-гибридизации, начните со взятия среза ткани на предметном стекле. Этот раздел содержит целевую РНК, предварительно гибридизованную с зондом РНК, меченным пероксидазой хрена.
Нанесите несколько капель диаминобензидина или DAB, субстрата для обнаружения, на участок ткани и инкубируйте.
DAB проникает в клетку, и фермент пероксидаза хрена окисляет ее с образованием коричневого осадка. Эта реакция придает коричневый цвет определенным последовательностям РНК в клетке. Клетки, которые не содержат целевой РНК, не будут иметь пероксидазной активности и останутся неокрашенными.
Далее запятнайте участок ткани гематоксилином. Гематоксилин связывается с ДНК и придает участок ткани фиолетовый оттенок.
Обработайте участок ткани аммиачной водой – раствором для воронения. Он снижает интенсивность фиолетового пятна, заставляя клетки казаться синими. Этот шаг необходим для четкой визуализации коричневых пятен внутри клеток.
Теперь погрузите участок ткани во все возрастающие концентрации этанола и впоследствии обработайте его ксилолом – органическим растворителем. Эти шаги обезвоживают участок ткани для получения более качественных изображений.
Наконец
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео