Забор хориоаллантоисной мембраны цыплят: метод выделения хориоаллантоисной мембраны опухолевого трансплантата из куриного яйца

Хориоаллантоисная мембрана или КАМ представляет собой внеэмбриональную мембрану, плотно прилегающую к внутренней мембране скорлупы интактного яйца. CAM является идеальной системой для имплантации и моделирования опухолей, поскольку это естественно иммунодефицитная и сильно васкуляризированная мембрана.

Чтобы получить опухоленосящий КАМ, сначала возьмите жизнеспособное оплодотворенное куриное яйцо с полностью развитым КАМ, ранее пересаженным с опухолью. Добавьте параформальдегид в CAM. Параформальдегид сшивает мембранные белки, делая мембрану более жесткой, чтобы облегчить ее сбор.

Затем разрежьте вокруг яйца, чтобы отделить верхнюю часть яичной скорлупы от остальной части яйца, при этом CAM, несущий опухоль, все еще прикреплен к удаленной скорлупе. Удерживайте и поднимайте CAM одним краем, чтобы плавно отделить его от яичной скорлупы.

После этого поместите собранный CAM в параформальдегид опухолевым трансплантатом вверх. Параформальдегид сохраняет морфологию CAM и опухолевого трансплантата, тем самым подготавливая собранную мембрану к различным последующим анализам.

В конце инкубации поместите яйца на лабораторный стол. С помощью шприца проколотите пленочную повязку каждого яйца и нанесите около 300 микролитров 4% параформальдегида на каждую хориоаллантоевую мембрану, чтобы немного напрячь ткань и облегчить процесс сбора.

С помощью ножниц удалите верхнюю половину яичной скорлупы с прикрепленной хориоаллантоисной мембраной. Уменьшите размер раковины примерно до 3 сантиметров в диаметре, сохранив в центре фрагмента раковины участок хориоаллантоисной мембраны, где был привит ганглий дорсального корешка и опухолевые клетки. Затем захватите хориоаллантоисную мембрану тонкими щипцами и отделите ткань от яичной скорлупы для переноса в одну лунку 6-луночной пластины, содержащей 2 миллилитра 4% параформальдегида на лунку.