Криофрезерование децеллюляризованной ткани: методика получения мелкодисперсного порошка внеклеточного матрикса

Криогенное измельчение или криофрезерование — это метод, который позволяет охлаждать децеллюляризованные образцы тканей до экстремально низких температур и измельчать до мелкого порошка, сохраняя при этом их биохимический состав.

Для начала получите интересующий нас лиофилизированный децеллюляризованный внеклеточный матрикс или ВКМ, полученный из тканевой ткани. Пропустите его через мясорубку, чтобы получить мелкие осколки.

Далее переложите измельченные фрагменты ECM в банку для измельчения. Введите в банку для помола мелющие шары. Погрузите загруженный расширительный стакан в жидкий азот, чтобы заморозить образец при температуре −196 °C.

Загрузите охлажденную банку в систему криофрезерования. Подвергнуть замороженный образец криофрезерованию с соответствующей частотой в течение желаемой продолжительности.

Во время криофрезерования размольная банка колеблется радиально в горизонтальном положении. Как следствие, инерция мельничных шаров позволяет им с высокой энергией воздействовать на замороженный образец на закругленных концах банки и измельчать его.

Кроме того, движение размольного стакана в сочетании с движением мелющих шаров способствует интенсивному перемешиванию образца с получением мелкодисперсного порошка с равномерным распределением частиц по размерам.

Теперь переложите криофрезерованный порошок ECM в стеклянный флакон. Плотно закройте флакон, чтобы предотвратить контакт с влагой. Высушите образец до дальнейшего использования.

С помощью острых хирургических ножниц мелко измельчите децеллюляризованную ткань. Чтобы криомилировать обрабатываемую ткань, заполните 25-миллилитровую фрезерную камеру из нержавеющей стали для лабораторной системы шаровых мельниц измельченным лиофилизированным ЭХМ и добавьте два 10-миллиметровых фрезерных шара из нержавеющей стали.

Закройте и полностью погрузите загруженную камеру измельчения в жидкий азот на 3 минуты. Затем измельчите замороженный образец при температуре 30 герц в течение 3 минут. Повторите погружение в жидкий азот и измельчение до тех пор, пока ECM не превратится в мелкий порошок.