Получение суспензии ЭКМ: метод получения гомогенной суспензии из внеклеточного матрикса, полученного из ткани

Внеклеточный матрикс или ВКМ, сложная опорная сеть в тканях, состоит из протеогликанов и белков.

Чтобы получить гомогенизированный ВКМ, начните с взятия отмеренного количества децеллюляризованного порошка ЭХМ в пробирку. Теперь добавьте в трубку подкисленный буфер, чтобы образовалась суспензия ECM.

Одновременно в другой пробирке растворить альфа-амилазу – гликолитический фермент – в том же подкисленном буфере. Кислый pH этого буфера способствует оптимальной активности фермента альфа-амилазы.

Далее дополните пробирку, содержащую суспензию ECM, раствором фермента альфа-амилазы. Инкубируйте трубку при постоянном перемешивании. Альфа-амилаза гидролизует гликаны - углеводные фрагменты, присутствующие в протеогликанах.

Центрифугой гранулировать богатую белком ECM фракцию, оставляя переваренные гликаны и отработанные ферменты в надосадочной жидкости. Выбросьте надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте гранулу в растворе хлорида натрия. Ионы хлора извлекают белки из гранул ECM в суспензию. Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость, содержащую хлорид натрия.

Далее добавьте уксусную кислоту в гранулу ВКМ, содержащую белок. Уксусная кислота дополнительно растворяет белковые агрега