Анализ популяционной дискриминации рака: метод выделения раковых стволовых клеток с помощью анализа на отток красителя Хёхста

Опухоль содержит небольшую часть стволовых клеток, известную как побочная популяция. Эти клетки устойчивы к химиотерапии, что делает их ответственными за рецидив рака.

Чтобы изолировать побочную популяцию раковых клеток, начните с добавления раствора флуоресцентного красителя Хёхста во флакон, содержащий суспензию раковых клеток. Внутри нормальных раковых клеток молекулы Хёхста проникают в ядро и связываются с богатой A-T областью ДНК, что приводит к высокой флуоресценции в этих клетках.

В противоположность этому, боковая популяция содержит высокую концентрацию транспортеров ABC - эффлюксных насосов, которые быстро удаляют молекулы красителя из клетки. Этот активный отток молекул красителя заставляет боковую популяцию флуоресцировать с низкой интенсивностью.

Теперь возьмите еще один флакон с раковыми клетками, обработанными Хёхстом, и добавьте в него Верапамил. Этот флакон действует как контроль, так как Верапамил блокирует транспортеры ABC. Этот этап приводит к уменьшению оттока Хёхста и сохранению красителя внутри боковых популяционных клеток.

Затем закрасьте клетки в обоих флаконах с помощью йодида пропидия. Йодид пропидиума проникает исключительно в ядро мертвых клеток и интерк