Экстракция спинного мозга: протокол выделения спинного мозга у мышей для исследований in vitro

Для извлечения спинного мозга начните с усыпленной мыши в положении лежа. Распылите этанол, чтобы предотвратить любое потенциальное загрязнение мехом.

Разрежьте среднюю линию от головы до хвоста и откройте кожу, чтобы обнажить подлежащие ткани. Осмотрите череп мыши, чтобы найти краниоцервикальный переход, который соединяет череп с шейным отделом позвоночника.

Затем надрежьте краниоцервикальный переход перпендикулярно, чтобы разорвать связь между головой и шеей. Рассекаем позвоночник до пятого поясничного позвонка. Впоследствии разрежьте позвоночник на пятом поясничном позвонке, чтобы разорвать связь с нижними уровнями позвонков.

Теперь поверните мышь в положение лежа на спине. Разрежьте брюшину и грудную стенку, чтобы обнажить брюшную и грудную полость. Удалите брюшинные и забрюшинные органы, чтобы получить доступ к позвоночному столбу.

Разрежьте ребра, чтобы отделить позвоночный столб от остального тела. Наконец, промойте изолированный спинной мозг холодным солевым раствором, чтобы смыть любые загрязнения крови.

После усыпления животного в камере с СО2 пропитайте мех 70% этанолом и дайте ему высохнуть. Прижмите мышь в положении лежа, а затем сделайте разрез по средней линии, проходящий краниокаудально от задней части шеи до поясничного отдела позвоночника.

Далее с помощью щипцов приподнимают дермальные лоскуты с обеих сторон и обнажают подкожную клетчатку. Пальпируйте череп мыши до тех пор, пока не будет выявлен краниоцервикальный переход. Используйте ножницы, расположенные под углом перпендикулярно животному, чтобы разрезать шейные мышцы и позвоночник в области краниоцервикального соединения. Затем рассеките позвоночник каудально и с помощью ножниц выполните полное каудальное пересечение пятого поясничного позвонка.

Далее расположите мышь в положении лежа на спине и, сделав разрез по средней линии от шеи до живота, втяните кожу в боковом направлении, а затем разрежьте брюшину.

Краниально вскройте грудную стенку ножницами. После удаления органов брюшины и забрюшинного пространства с помощью щипцов и хирургического лезвия разрезают ребра, оставляя примерно 5 миллиметров ребер, выступающих из позвоночного столба. Удалите позвоночный столб из остального тела и дважды промойте холодным PBS.