Децеллюляризованный препарат из пищевода свиней: метод получения бесклеточного каркаса из пищевода свиньи

Децеллюляризованные скаффолды, полученные из внеклеточного матрикса специфической ткани, имитируют их естественное внеклеточное микроокружение. Эти каркасы сохраняют свою структурную целостность и биохимический состав и служат перспективными платформами для тканевой инженерии.

Чтобы приготовить децеллюляризованный пищеводный каркас свиньи, начните со свежеиссеченного пищевода свиньи. Рассеките пищевод пополам в продольном направлении и промойте его подходящим буфером, чтобы удалить любой мусор. Далее закрепите пищевод его слизистой поверхностью, самым внутренним слоем, обращенным вверх.

Отделите слизистую оболочку от нижележащей подслизистой оболочки на одном конце пищевода. Рассеките пищевод в продольном направлении вдоль рыхлой соединительной ткани слизистой оболочки, называемой собственной пластинкой, чтобы полностью отделить поверхность слизистой оболочки от нижележащей подслизистой оболочки.

Далее иссекаются проксимальные и дистальные отделы слизистой оболочки, которые содержат более высокую плотность подслизистых желез и более толстый собственный слой пластинки. Разрежьте ткань слизистой на кусочки одинакового размера.

Обработайте ткани гипертоническим солевым раствором с добавлением антибиотиков. Антибиотики помогают предотвратить рост бактерий. При высокой концентрации растворенного вещества вода выходит из клеток и вызывает их усадку. Этот шаг еще больше способствует клеточной гибели и отделению от внеклеточного матрикса.

Теперь аккуратно отделите ослабленный эпителий от подлежащей ткани. Промойте ткань буфером, чтобы удалить клеточный мусор. Наконец, инкубируйте ткань в глицерине, который еще больше облегчает децеллюляризацию тканей путем обезвоживания и лизирования клеток, сохраняя при этом целостность базальной мембраны.

Чтобы подготовить децеллюляризованные пищеводные каркасы свиньи, начните с того, что с помощью ножниц и пинцета разрежьте пищевод свиньи в продольном направлении. Затем промойте пищевод в 180-миллилитровой стерильной кастрюле, содержащей 100 миллилитров стерильного PBS, в течение 10 минут, осторожно встряхивая, чтобы удалить любой мусор.

Пока ткань прополаскивается, распылите на пробковую доску для вскрытия 70% этанола. Когда пробка высохнет, приколите пищевод к доске слизистой стороной вверх. Теперь используйте стерильный пинцет, чтобы захватить поверхность слизистой оболочки на одном конце пищевода и оттянуть ткань от доски, чтобы отделить слизистую оболочку от нижележащей подслизистой оболочки.

Затем, используя стерильное лезвие скальпеля, рассеките пищевод в продольном направлении вдоль собственной пластинки, удаляя штифты по мере прогрессирования рассечения, чтобы позволить приподнять слизистую оболочку. Выбросьте нижележащую подслизистую, а оставшуюся слизистую разрежьте с помощью скальпеля на квадратные кусочки по 5 сантиметров. Промойте кусочки в 150 миллилитрах стерильного PBS с легким помешиванием, как только что продемонстрировано.

Через пять минут переложите ткань в 180-миллилитровую кастрюлю, содержащую 150 миллилитров 1 моляра раствора натрия хлорида, дополненного антибиотиками при температуре 37 градусов Цельсия. Через 72 часа переведите ткань в 150 миллилитров стерильного PBS, после чего эпителий начнет заметно отделяться от подлежащей ткани.

С помощью стерильных щипцов и лезвия скальпеля удалите отслоившийся эпителий, а остатки ткани поместите в свежую кастрюлю со 150 миллилитрами стерильного PBS с тремя пятиминутными полосканиями с легким помешиванием. Теперь ткань должна храниться в глицерине не менее четырех месяцев для полной стерилизации каркаса.