JoVE Encyclopedia of Experiments
Исследования рака
0 просмотров • 3:24 мин • April 30th, 2023
При лептоменингеальной болезни раковые клетки из других органов тела метастазируют в спинномозговую жидкость или спинномозговую жидкость, содержащуюся в лептоменингах – тонких слоях тканей, окружающих мозг.
Интрацеребровентрикулярная инъекция способствует прямому введению препарата в ликвор, минуя гематоэнцефалический барьер.
Для начала подготовьте мышь под наркозом в положении лежа.
Надрежьте голову, чтобы показать череп. Определить местоположение брегмы – места соединения коронарных и сагиттальных швов.
С помощью микросверла просверлите отверстие в черепе на соответствующем расстоянии от брегмы, чтобы получить доступ к наружному менингеальному слою плотной соединительной ткани – твердой мозговой оболочке.
Затем аккуратно вставьте оммайю - небольшой порт для инъекций - в отверстие.
После этого зашите окружающую кожу и дайте оммайе закрепиться на оптимальное время.
Далее подсоедините к оммайе шприц, наполненный нужной суспензией препарата.
После установки подходящей скорости потока введите суспензию препарата в твердую мозговую оболочку.
Ommaya обеспечивает стерильный путь для прямой доставки лекарственного препарата в спинномозговую жидкость в желудочки головного мозга.
Теперь отсоедините шприц и оставьте оммайю нетронутой в черепе для последующей дозировки.
Дайте мыши восстановиться.
Со временем молекулы препарата мигрируют к месту рака и препятствуют росту и пролиферации раковых клеток.
Соберите инъекционное устройство Murine Ommaya с помощью миниатюрного инъекционного порта 25G и 1-миллиметрового распорного диска.
Используйте стерильный клей с цианоакрилатом, чтобы обеспечить проникновение примерно 2,5 миллиметров металлической канюли в правое полушарие головного мозга и подготовить кожу по стерильной методике.
Сделайте небольшой разрез кожи с последующим тупым рассечением подлежащих подкожных тканей, чтобы обнажить череп. Высушите череп с помощью пропитанных перекисью водорода аппликаторов с ватным наконечником.
Просверлите отверстие диаметром 0,9 миллиметра в черепе, на 0,5 миллиметра сзади и на 1,1 миллиметра латерально от брегмы, чтобы обнажить твердую мозговую оболочку.
Отодвиньте микродрель в сторону и аккуратно надрежьте кость, непосредственно окружающую отверстие для заусенца. Прикрепите к черепу инъекционный порт с помощью цианоакрилатного стерильного клея и введите его на глубину примерно 2,5 миллиметра.
Сшить разрез с помощью 4-0 нерассасывающихся нейлоновых нитей по схеме прерывистого стежка или кисетного шва. Поместите мышей после операции в индивидуальные клетки для восстановления.
Чтобы ввести дозу мыши, получите доступ к Murine Ommaya с помощью адаптера для инъекции порта и шприца Hamilton. С помощью щипцов удерживайте верхнюю часть миниатюрного порта для инъекций и аккуратно вставьте адаптер инжектора порта полностью в перегородку порта.
После того, как инъекция будет сделана, отсоедините Murine Ommaya от адаптера для инъекции порта с помощью щипцов.