Модель глиомы, меченной люциферазой: опосредованный лентивирусом метод получения стволовых клеток глиомы, меченных люциферазой, для терапевтических исследований in vitro

Стволовые клетки глиомы или ГСК являются субпопуляцией глиомы – рака глиальных клеток в головном мозге.

Маркировка этих GSC биолюминесцентными ферментами, такими как люцифераза, помогает проводить высокопроизводительные визуализирующие анализы для скрининга лекарственных препаратов.

Чтобы получить меченые люциферазой ГСК, начните с культивирования ГСК в подходящей питательной среде.

Центрифугируйте культуру для получения клеточной гранулы и удалите надосадочную жидкость.

Добавьте в гранулу подходящие пищеварительные ферменты. Эти ферменты диссоциируют клеточные кластеры и разрушают любые следы соединительной ткани с получением одноклеточной суспензии.

Теперь центрифугируйте одноклеточную суспензию и удалите надосадочную жидкость. Повторно суспендируйте гранулу в свежей среде.

Далее засейте семена нужной концентрации клеток в культуральной тарелке.

Инкубируйте культуру и дайте клеткам прилипнуть к планшету с культурой.

Затем добавьте желаемый титр вируссодержащей генной конструкции для зеленого флуоресцентного белка, усиленного люциферазой, или EGFP, и инкубируйте.

Вирус взаимодействует с поверхностными рецепторами ГСК, вызывая высвобождение вирусной РНК, содержащей люциферазу-EGFP.