Клеточный биолюминесцентный анализ: высокопроизводительный метод комбинаторного скрининга лекарственных средств

0 views • 3:17 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Клеточная биолюминесценция является высокочувствительным и быстрым подходом к широкомасштабному скринингу противораковых препаратов.

В этой методике используются опухолевые клетки, экспрессирующие люциферазу – фермент, который катализирует светопроизводящую химическую реакцию, заставляя клетки-хозяева светиться в темноте. Интенсивность излучаемой люминесценции прямо пропорциональна плотности живых клеток.

Для начала засейте клетки, экспрессирующие люциферазу, в оптически прозрачной культуральной пластине, покрытой внеклеточным матриксом или ВКМ, и инкубируйте.

Во время инкубации ВКМ хорошо способствует прикреплению клеток к культуре.

Далее берут концентрированные запасы лекарственной комбинации и добавляют разные объемы питательных сред для приготовления серийного разведения лекарственной смеси.

Теперь удалите питательную среду из прилипших клеток. Добавляйте разные разведения лекарственной комбинации и инкубируйте.

Во время инкубации комбинация препаратов действует синергетически на клеточные мишени.

Теперь удалите содержащую лекарство среду и добавьте свежую среду, содержащую люциферин.

Люциферин диффундирует по мембране и проникает в клетки. Люциферазы, экспрессируемые клетками, используют клеточную АТФ для окисления люциферина и излучения световых сигналов.

Количественно оцените клеточную биолюминесценцию с помощью системы визуализации.

Снижение светового излучения при увеличении концентрации препарата свидетельствует о снижении жизнеспособности клеток. Это коррелирует с антипролиферативным действием препарата на клетки-мишени.

Смажьте 96-луночные оптические донные пластины смесью внеклеточного матрикса типа Матригель и инкубируйте их в течение 1 часа при температуре 37 градусов Цельсия. Удалите излишки смеси и аккуратно промойте пластины с помощью PBS.

Затем посейте клетки XG387-Luc с плотностью 1000 клеток в 100 микролитров питательной среды в каждую лунку покрытых покрытием планшетов и культивируйте их в течение ночи. На следующий день понаблюдайте за клетками под микроскопом, чтобы подтвердить их прикрепление к пластине.

Далее готовят 200-микролярный раствор темозоломида и 2-микромолярные растворы целевых агентов в культуральной среде. Для скрининга комбинированного лекарственного средства удаляют пустую среду и добавляют среду, содержащую либо 200-микромольный темозоломид, либо 2-микромолярный таргетный агент, либо комбинацию того и другого, в каждую лунку для 3 технических повторов за одну обработку.

Выдерживайте тарелку при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислом газе в течение 3 дней. Получение изображений клеточной биолюминесценции в пластине с помощью системы визуализации спектра IVIS. Используя встроенное программное обеспечение, создайте несколько круговых областей интересующей области и количественно оцените клеточную биолюминесценцию.

04:47

Автономно Биолюминесцентный клетках млекопитающих для непрерывных и мониторинга в реальном времени цитотоксичности

Related Videos

0 Views

09:17

Биолюминесценция изображений из иммунокомпетентных животной модели для глиобластомы

Related Videos

0 Views

09:09

Высокая пропускная способность, в режиме реального времени, двойного считывания Тестирование внутриклеточного антимикробной активности и эукариотической клетки цитотоксичность

Related Videos

0 Views

10:38

Мониторинг Cell-автономных циркадные ритмы часы экспрессии гена люциферазы Использование Репортеры Биолюминесценция

Related Videos

0 Views

02:57

Флуоресцентный анализ с использованием сконструированных лимфоцитов для скрининга иммуномодулирующих соединений

Related Videos

0 Views

12:55

Высокая пропускная Функциональная Скрининг с использованием Домашнее двойного свечения люциферазы

Related Videos

0 Views

10:13

Мультиплексированную Люциферазы скрининга на основе Платформы Допрос связанных с раком передачи сигнала в культуре клеток

Related Videos

0 Views

09:39

Медикаментозная сенсибилизация АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ: Анализ Рационализация и Миниатюризация для малого молекул и миРНК отбора заявок

Related Videos

0 Views

08:43

Флуоресцентным на основе анализа Лимфоцит Подходит для высокопроизводительного скрининга малых молекул

Related Videos

0 Views

09:57

Система для эффективности и цитотоксичности скрининга ингибиторов Таргетинг внутриклеточных Микобактерии туберкулеза

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026