Анализ микроглиального фагоцитоза: анализ in vitro для создания модели микроглиального фагоцитоза для клеток нейробластомы с использованием макрофагов iPSC

Микроглия — это макрофаги головного мозга, которые помогают удалять патогены, клеточный мусор и раковые нервные клетки или нейробластому с помощью процесса, называемого фагоцитозом.

Чтобы имитировать фагоцитоз in vitro, начинают с культивирования клеток нейробластомы, зафиксированных в параформальдегиде.

Параформальдегид, химический фиксатор, вызывает случайное распределение мембранных фосфолипидов, таких как фосфатидилсерин, что приводит к их транслокации на внешнюю поверхность клеточной мембраны при одновременной стабилизации клеточной структуры.

Теперь добавьте pH-чувствительный амино-реактивный флуоресцентный краситель к культуре клеток нейробластомы и инкубируйте.

Молекулы красителя связываются с аминогруппами фосфатидилсерина на поверхности клеток нейробластомы.

Центрифугируйте пробирку и удалите надосадочную жидкость, содержащую несвязанные молекулы красителя. Промойте клеточную гранулу подходящим буфером и центрифугой.

Удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу в питательной среде.

Далее семена предварительно окрашивают макрофаги в культуральную пластину. Окрашенные макрофаги будут выглядеть красными с синим ядром.

Добавьте к этой культуре окрашенные кле