Очистка ядер на основе градиентного центрифугирования: метод получения сверхчистой фракции интактных ядер с использованием градиентного центрифугирования по плотности

Чтобы выделить и очистить неповрежденные ядра, начните с взятия сырой фракции ядер в пробирку. Фракция содержит неповрежденные ядра вместе с разбитыми ядрами и обломками.

Смешайте эту фракцию с подходящей средой с градиентом плотности таким образом, чтобы она образовала суспензию наименьшей концентрации.

Теперь слоистые растворы с возрастающей плотностью той же градиентной среды под предварительно приготовленной фракцией сырых ядер генерируют многоступенчатый прерывистый градиент плотности. Этот шаг позволяет фракции сырых ядер сформировать полосу в верхней части градиента.

Далее центрифугируйте пробирку на низкой скорости.

Исходя из различий в форме и массе, неповрежденные ядра мигрируют по-разному по сравнению с обломками и ядерными фрагментами. В результате неповрежденные ядра образуют отдельную полосу.

После центрифугирования найдите отчетливую полосу, состоящую из интактных ядер, на границе растворов градиента плотности.

С помощью пипетки аспирируйте верхние слои градиента, чтобы облегчить доступ к полосе чистых ядер. Соберите полосу, содержащую ядра, в свежую пробирку.

Визуализируйте эти ядра под световым микроскопом. Интактные ядра выглядят идеально круглыми с неповрежденной