JoVE Encyclopedia of Experiments
Исследования рака
0 просмотров • 2:37 мин • April 30th, 2023
Чтобы криоконсервировать образец мозга мышей путем мгновенной заморозки, начните с того, что возьмите стакан, наполненный раствором изопентана - жидкостью с высокой проводимостью - и погрузите его в банку с жидким азотом.
Заморозьте изопентан до тех пор, пока раствор не станет вязким.
Тем временем возьмите образец мозга всей мыши с префиксом в растворе сахарозы. Это лечение предотвращает деформацию тканей мозга на последующих этапах.
Извлеките образец мозга из раствора сахарозы и промокните его насухо, чтобы удалить любые следы сахарозы.
Затем поместите мозг в желаемой ориентации в глубокую криомолду, содержащую слой встраиваемой среды.
Наложите на мозг в криомолде больше встраиваемой среды, чтобы убедиться, что весь орган покрыт.
Затем погрузите криомолд, содержащий встроенный мозг, в предварительно охлажденную ванну с изопентаном. Быстрое охлаждение мозговой ткани до сверхнизкой температуры обеспечивает сохранение архитектуры мозга без каких-либо искажений.
Теперь дайте образцу мозга застыть, пока встраиваемая среда не затвердеет, образуя студенистый слой вокруг мозга, удерживая его на месте.
После замораживания выньте криомолд из изопентановой ванны и заверните криоконсервированный мозг мыши в лист фольги.
Храните образец при температуре минус восемьдесят градусов Цельсия для дальнейшего гистологического анализа.
Чтобы подготовиться к криоконсервации, заполните банку холодным изопентаном/2-метилбутаном и поместите банку в емкость, наполненную жидким азотом. Пока растворитель остывает, промокните мозг насухо на листе фильтровальной бумаги и поместите мозг в криоформу с маркировкой.
Осторожно добавьте примерно 5 миллилитров оптимальной температуры режущей среды в центр криомолда и поместите мозг в форму в нужной ориентации. Используя чистые щипцы, быстро поместите криомолд в охлажденный изопентан/2-метилбутан на 30-40 секунд.
Как только режущая среда застынет, переложите криомолд на сухой лед и оберните криомолд и замороженную мозговую ткань алюминиевой фольгой для хранения при температуре минус 80 градусов Цельсия.