Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 2:41 мин. • April 30th, 2023
Чтобы дифференцировать специфические клеточные популяции в гетерогенной ткани опухоли головного мозга мыши для их последующей изоляции, начните со взятия предметного стекла, на котором находится интересующий нас участок криоконсервированной ткани опухоли головного мозга.
Последовательно инкубируйте ткань в уменьшающихся концентрациях этанола. Этанол растворяет проникшую в ткань среду и фиксирует ткань, сохраняя при этом целостность нуклеиновых кислот.
Кроме того, этанол регидратирует ткани, обеспечивая равномерное окрашивание на последующих этапах.
Теперь обработайте ткань Cresyl violet. Крезилфиолетовый - основной краситель - окрашивает кислые клеточные компоненты, такие как нуклеиновые кислоты.
После этого противодействуйте окрашиванию ткани эозином Y. Эозин Y - кислотный краситель - окрашивает основные клеточные компоненты, такие как цитоплазматические белки.
Этот этап дифференциального окрашивания помогает различать цитоплазму и другие клеточные структуры, что позволяет идентифицировать клетки, представляющие интерес.
После окрашивания погрузите ткань в возрастающую концентрацию этанола, чтобы обезвоживать ткань и избежать чрезмерного деформации тканей.
Далее промойте салфетку ксилолом. Ксилол вытесняет и выводит этанол из тканевого участка.
Наконец, добавьте подходящий монтажный раствор на участок ткани, чтобы сохранить морфологию ткани.
Обработанный участок ткани готов к использованию для лазерной микродиссекции – процесса, который позволяет точно выделить конкретные клетки из ткани.
Погрузите предметные стекла в 30-секундные последовательные нисходящие погружения этанола с последующим окрашиванием кристаллическим фиолетовым раствором на 20 секунд и 5 секунд в 0,5% раствор эозина Y.
В конце инкубации эозина Y используйте фильтровальную бумагу, чтобы промочить предметные стекла насухо и обезвожить предметные стекла в последовательных восходящих погружениях этанола. После 60-секундного погружения этанола промойте предметные стекла в емкости с ксилолом в течение 3 минут.
Затем просушите предметные стекла на поверхности, не содержащей РНКазы, при комнатной температуре в течение 10 секунд перед установкой образцов в монтажную среду, приготовленную из воды, не содержащей РНКазы. Через 10–20 секунд перенесите предметные стекла на платформу микроскопа для микродиссекции.