Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:00 мин. • April 30th, 2023
Убиквитинирование белков характеризуется добавлением убиквитина - регуляторного мини-белка - через остатки диглицина к остаткам лизина белка субстрата. Это создает лизин-глицин-глициновую связь между субстратным белком и убиквитином.
Чтобы выделить пептиды, меченные убиквитином, начните с приема пептидной смеси.
Лечите эти пептиды с помощью ферментного коктейля эндонуклеазы. Во время лечения ферменты Lys-C и трипсин эффективно расщепляют убиквитинилированные пептиды в остатке аргинина, в результате чего образуются фрагменты пептидов, содержащие характерный мотив диглицина.
Добавьте эти фрагменты пептида в суспензию из конъюгированных антителами гидрогелевых шариков.
Эти антитела содержат сайт узнавания диглицина, который связывается исключительно с убиквитинилированными пептидами, образуя пептид-гранулированный комплекс.
Центрифуга для гранулирования убиквитинилированных пептидно-гранулированных комплексов. Удалите несвязанный неубиквитинилированный пептидсодержащий надосадочную жидкость.
Загрузите комплексы на фильтрующую сборку. Центрифуга для удаления буфера и улавливания пептид-конъюгированных шариков.
Добавьте подкисленный реагент, который снижает pH, вызывая отделение пептидо
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео