Выделение внеклеточных везикул, происходящих из микроглии, на основе SEC: метод выделения внеклеточных везикул из кондиционированных питательных сред микроглии

Клетки микроглии высвобождают иммунные медиаторы в форме внеклеточных везикул или ВВ, включая более крупные апоптотические тельца и меньшие микроразмерные везикулы, в питательную среду in vitro.

Чтобы изолировать ВВ, начните с приема кондиционированной среды с микроглией. Эта питательная среда содержит клетки микроглии вместе с высвобожденными ВВ. Центрифугируйте среду для гранулирования ячеек.

Соберите надосадочную жидкость, содержащую EV, мусор и белковые агрегаты, в свежую пробирку. Снова центрифугу, чтобы удалить клеточный мусор и крупные апоптотические тела.

Переложите надосадочную жидкость в ультрацентрифужную пробирку. Центрифуга на высокой скорости.

Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую отработанную среду, и повторно суспендируйте EV и гранулу белкового агрегата в нужном буфере.

Одновременно возьмем колонку эксклюзионной хроматографии с соответствующим фильтром на ее основе.

Плотно упаковать колонку гель-фильтрационной матрицей, состоящей из сферических гелевых шариков, образующих пористое сито определенного размера пор.

Загрузите суспензию EV и белкового агрегата поверх неподвижной фазы.

Когда суспензия проходит через колонну, более крупные электромобили перемещаются