Экстракция внеклеточных везикул: метод выделения внеклеточных везикул из образцов цельных тканей с помощью дифференциального центрифугирования
Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:13 мин. • April 30th, 2023
В целых тканях внеклеточные везикулы или ВВ высвобождаются клетками в интерстициальную жидкость. К ним относятся апоптотические тельца, микровезикулы и экзосомы. Электромобили играют важную роль в поддержании межклеточной связи.
Чтобы извлечь EV, начните со взятия образца всей ткани.
Обработайте ткань соответствующим буфером для диссоциации. Компоненты диссоциативного буфера разрушают внеклеточный матрикс, присутствующий в ткани, в конечном итоге разрыхляя клетки.
Перенесите суспензию в гомогенизатор и механически разрушьте ткань еще больше, чтобы диссоциировать ее и высвободить клетки.
Затем центрифугируйте гомогенат на низкой скорости, чтобы гранулировать клетки и фрагменты тканей, пока EV остаются в надосадочной жидкости.
Возьмите надосадочную жидкость в свежую пробирку. Центрифугируйте на высокой скорости, чтобы гранулировать большую часть апоптотических тел большего размера, оставляя EV меньшего размера в надосадочной жидкости.
Соберите ВВ-содержащую надосадочную жидкость в шприц. Отфильтруйте компоненты, чтобы удалить все оставшиеся апоптотические тела и собрать небольшое количество электромобилей.
Центрифугируйте фильтрат для получения EV в грануле. Выбросьте оставшийся буфе
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео