Выделение астроцитов: метод получения чистого препарата кортикальных астроцитов мыши
Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 6:41 мин. • April 30th, 2023
Культура астроцитов in vitro помогает исследовать биологическую роль астроцитов – наиболее распространенных клеток мозга.
Начните с изучения мозга новорожденной мыши, помещенного под препарирующий микроскоп.
Удалите обонятельные луковицы и мозжечок.
Выполните разрез по средней линии между двумя полушариями, чтобы разделить кору головного мозга.
Удалите мозговые оболочки, чтобы избежать контаминации в культуре астроцитов фибробластами и менингеальными клетками.
Перенесите полушария коры головного мозга в ледяную среду и пропустите через мясорубку на мелкие кусочки.
Соберите кусочки коры головного мозга в пробирку, содержащую трипсин. Трипсин, фермент протеазы, переваривает белки клеточной адгезии, способствуя разделению клеток.
Центрифуга для гранулирования переваренной ткани.
Удалите надосадочную жидкость и добавьте в гранулу астроцитарную среду. Энергично пипеткайте для высвобождения смешанной клеточной популяции астроцитов, микроглии и клеток-предшественников олигодендроцитов или OPC.
Поместите эту клеточную суспензию в колбу для культуры тканей, покрытую полилизином, и инкубируйте.
Отрицательно заряженные клетки присоединяются к положительно заряженному полилизину и разрастаются
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео