Выделение клеток мозга из личинок рыбок данио-рерио: метод получения интактных нейронов, макрофагов и микроглии из ткани мозга рыбок данио

Мозг рыбки данио состоит из нейронов - нервных клеток, которые играют заметную роль в обработке информации. Кроме того, он включает в себя популяцию поддерживающих иммунных клеток, включая макрофаги и микроглии, которые населяют межнейронное пространство.

Чтобы выделить все эти типы клеток мозга у рыбки данио, сначала возьмите личинок данио-рерио под наркозом в чашке Петри, содержащей соответствующие среды.

Визуализируйте рыбку данио под стереомикроскопом и пересеките головы личинок над желточным мешком, чтобы сохранить мозг в целости.

Переложите вырезанные головки в гомогенизатор, наполненный предварительно охлажденным материалом, помещенный на лед. Низкая температура помогает предотвратить деградацию клеток мозга.

С помощью пестика гомогенизируйте ткани мозга рыбок данио. Гомогенизация разрушает внеклеточный матрикс и инициирует диссоциацию нейронов, макрофагов и микроглии от ткани мозга.

Этот этап также отделяет миелин - богатый липидами изолирующий слой - от нейронов.

Пропустите гомогенат через ситечко, чтобы захватить большие скопления клеток.

Центрифугируйте фильтрат для гранулирования клеток и фрагментов миелиновой оболочки. Выбросьте загрязнениесодержащее надосадочную жидко