Выделение микроглии методом иммуноокрашивания Сопряженная сортировка клеток: метод иммуноокрашивания для выделения микроглии из клеток мозга рыбок данио-рерио с использованием сортировки флуоресцентных активированных клеток

При патологических состояниях активированная микроглия – специализированные макрофаги головного мозга – способствуют устранению болезнетворных микроорганизмов и клеточного мусора. Эти микроглии экспрессируют уникальные рецепторы, которые отличают их от других макрофагов.

Чтобы выделить микроглию, начните с культуры клеток мозга, полученной из трансгенных рыбок данио, экспрессирующих специфические флуоресцентные молекулы в различных типах клеток.

Культура содержит смесь нейронов – экспрессирующих красную флуоресценцию, макрофагов – экспрессирующих зеленую флуоресценцию, и нефлуоресцентной микроглии.

Теперь добавьте блокирующий реагент и инкубируйте культуру с прерывистым перемешиванием. Блокирующий реагент связывается с неспецифическими участками на клетках и снижает фоновый сигнал.

Далее добавляем первичные антитела и инкубируем. Эти антитела связываются со специфическими рецепторами, экспрессируемыми на поверхности микроглии.

Центрифугируйте культуру и удалите надосадочную жидкость, содержащую несвязанные антитела. Повторно суспендируйте клеточную гранулу в свежей среде.

Впоследствии добавьте флуоресцентно-красящие конъюгированные вторичные антитела и инкубируйте. Эти антитела свя