Генерация индуцированных нейральных стволовых клеток (iNSCs) из мононуклеарных клеток периферической крови (PBMNCs): процедура на основе вируса Сендай для перепрограммирования PBMNC в iNSCs

Чтобы перепрограммировать соматические клетки в индуцированные нейральные стволовые клетки или iNSCs - стволовые клетки, обладающие высокой способностью к самообновлению и дифференцировке, начните с культивирования мононуклеарных клеток периферической крови в среде, не содержащей сыворотки, для расширения эритробластов.

Далее пипеткой поместите суспензию эритробласта в культуральный планшет. Обработайте клетки рекомбинантным вирусом Сендай или SeV. Эти вирусы кодируют перепрограммирование транскрипционных факторов. Центрифуга для осаждения клеток и инкубации.

После слияния SeV с мембраной клетки-хозяина геном вируса подвергается транскрипции с последующей трансляцией в цитоплазме. Эктопическая экспрессия транскрипционных факторов запускает процесс перепрограммирования клетки без интеграции генов в геном хозяина.

Теперь центрифугируйте культуру, чтобы удалить вирусы. Ресуспендируйте трансдуцированные клетки в подходящей среде с последующим нанесением покрытия. Далее, центрифугу для удаления клеточного мусора. Ресуспендируйте клетки в среде iNSC.

Затем засейте клетки в пластину, покрытую белком. Клетки прикрепляются к белковой оболочке в пластине. Дополняйте адгезивные клетки средой