Капельная цифровая полимеразная цепная реакция: метод генерации нанокапельных ПЦР-реакций для выявления редких опухолевых мутаций

Технология капельной цифровой полимеразной цепной реакции или дПЦР разделяет реагенты одной ПЦР-реакции на миллионы нанокапельных ПЦР-реакций. Это массовое разделение с последующей амплификацией обнаруживает небольшое количество мутантной ДНК на большом фоне ДНК дикого типа, что позволяет обнаруживать рак на ранней стадии.

Для начала аспирируйте мастер-смесь для дПЦР, содержащую флуоресцентно меченные олигонуклеотиды, а также другие реагенты для ПЦР и стабилизирующее капли масло. Добавляйте эту исходную смесь непосредственно на дно каждой лунки в пробирку для полоски ПЦР, чтобы избежать образования пузырьков воздуха. Далее добавьте образцы ДНК в реакционную смесь и несколько раз пипеткой перемешайте.

Теперь перенесем всю реакционную смесь в специализированный чип каплевидного прибора. Установите новую полосковую пробирку для ПЦР на каплеуловый инструмент. Генератор капель объединяет образец и масло для образования дискретных нанокапель с инкапсулированной областью, которая предотвращает перекрестное загрязнение между каплями.

После завершения дроплетизации перенесите полосковую пробирку для ПЦР в термоамплификатор для амплификации целевой ДНК. Затем загрузите продукт ПЦР в считыват