Почему проверка нулевой гипотезы важна для исследований взаимодействия МСК с опухолевыми клетками?

Проверка нулевой гипотезы позволяет объективно оценить, влияют ли скаффолды с заселенными МСК на рост или миграцию опухоли сверх базового уровня, что способствует строгой валидации мишеней и снижает неопределенность механизмов на ранних этапах исследования.

Как изоляция независимых переменных соотносится с посевом каркаса при проведении поисковых исследований?

Изоляция таких переменных, как степень увлажнения скаффолда, количество клеток и время инкубации, гарантирует, что наблюдаемые эффекты адгезии и инфильтрации MSC обусловлены контролируемыми параметрами, что повышает прогностическую достоверность последующих анализов.

Что позволяют количественные измерения зависимых переменных в рабочих процессах с использованием скаффолдов?

Количественная оценка адгезии, пролиферации и инфильтрации MSC в скаффолд обеспечивает воспроизводимые показатели для сравнения экспериментальных условий и оптимизации стратегий доставки клеток в доклинических моделях.

Почему требования к репликации имеют решающее значение для исследований кросс-функциональных скаффолдов?

Репликация обеспечивает согласованность посева скаффолдов и распределения МСК между различными экспериментами и группами, что позволяет надежно интегрировать данные и осуществлять кросс-функциональное взаимодействие при разработке методов клеточной терапии.

Какие возможности статистического анализа требуются перед внедрением протокола создания каркаса?

Для сравнения показателей адгезии, пролиферации и инфильтрации клеток в различных условиях необходим надежный статистический анализ, который обеспечит оптимизацию на основе данных и продвижение кандидатов для клеточной терапии на основе скаффолдов с учетом рисков.

MSC Seeded Scaffold Preparation: Методика подготовки каркаса, засеянного мезенхимальными стволовыми клетками, для хирургической имплантации в мышиную модель

JoVE Encyclopedia of Experiments

Исследования рака

0 просмотров • 4:49 мин • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Раковые клетки продуцируют хемотаксические факторы хоуминга для привлечения мезенхимальных стволовых клеток или МСК из кровеносных сосудов к месту расположения опухоли.

Чтобы изучить влияние этих клеток на рост опухоли in vitro, начните с взятия стерилизованного каркасного субстрата. Переложите его в лунную пластину, содержащую нужную среду, чтобы предварительно смочить строительные леса. Поместите его на сухую поверхность, чтобы удалить излишки среды, прилипшие к каркасу для лучшей адгезии ячеек. Переложите частично высохший каркас в свежую лунку. Засейте каплю суспензии MSC на строительные леса.

Кроме того, добавьте больше среды в углы лунки, чтобы создать камеру гидратации, предотвращающую испарение среды из капли во время последующей инкубации. Инкубируйте, чтобы МСК прилипли к поверхности каркаса. Переверните леса, чтобы обнажить незасеянную поверхность. Нанесите пипеткой свежую каплю суспензии МСК с этой стороны и дайте МСК прилипнуть.

После того, как МСК прилипнут к обеим сторонам каркаса, накройте его большим количеством среды, убедившись, что все клетки находятся в контакте со средой. Инкубируйте до тех пор, пока МСК не вырастут и не проникнут в щели и поры каркаса. Засеянный каркас MSC готов к хирургической имплантации.

Подготовьте каркасы за 48 часов до имплантации у мышей, предварительно разрезав каркасы PLA на куски размером с резекционную полость размером примерно 2 на 2 миллиметра. Стерилизуйте каркасы, погрузив в 70% этанол на 15 минут. Через 15 минут погрузите леса в PBS. Затем поместите каркасы в модифицированную среду Dulbecco's Modified Eagle's Medium, содержащую 10% эмбриональной бычьей сыворотки и 1% пенициллин-стрептомицина, готовя клетки к посеву.

Чтобы подготовить клетки, сначала поднимут культивируемые МСК с использованием 0,05% трипсина. Выдерживать при температуре 37 градусов Цельсия в течение 5 минут. После инкубации убедитесь, что клетки поднялись. Затем добавьте DMEM в колбу, чтобы инактивировать трипсин. Далее переложите содержимое колбы в 15-миллилитровую центрифужную пробирку. Подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра. Затем гранулируйте 5 раз по 10-пятую МСК для каждого каркаса с помощью центрифугирования при 100 x g в течение 5 минут.

После центрифугирования аспирировать надосадочную жидкость и ресуспендировать МСК в 5 микролитрах DMEM на 5 умножить на 10 до пятой клетки. Затем снимите скаффолд с помощью погружения DMEM с помощью щипцов и поместите его на крышку 6-луночной пластины. Снимите каркас с крышки, оставив после себя каплю излишков DMEM. Снова положите строительные леса на крышку в новое сухое место. Повторите от трех до пяти раз. Затем поместите частично высохший каркас в новую 6-луночную пластину для посева.

Частично высушенный каркас обеспечивает оптимальные результаты посева ячеек. Если каркас слишком влажный, клетки будут соскальзывать с каркаса и прилипать к пластине ниже. Если каркас высохнет, капля не будет распространяться по всему каркасу, что приведет к плохому первоначальному распределению клеток.

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 22 августа 2026

MSC Seeded Scaffold Preparation: Методика подготовки каркаса, засеянного мезенхимальными стволовыми клетками, для хирургической имплантации в мышиную модель

Обзор

Основные компоненты исследования

Область науки

Теоретические основы

Цель исследования

Используемые методы

Основные результаты

Выводы

Часто задаваемые вопросы

Практическая значимость для промышленности

Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках

Ранний поиск и валидация мишени

Скрининг и разработка методов анализа

Трансляционные и доклинические исследования

Интеграция конвейеров и рабочих процессов

Операционное и корпоративное воздействие

Особенности реализации

Часто задаваемые вопросы по биофармацевтике

Полный кожи Дефект Модель для оценки васкуляризации биоматериалов

Заполнение и имплантации биосинтетических ткани инженерии трахеи трансплантата в мышиной модели

Ткань-инженерный трансплантат для обрезанной реконструкции пищевода у крыс

Имплантация Ferumoxides Маркированный мезенхимальных стволовых клеток человека в Дефекты хряща

Использование прав Периваскулярная стволовых клеток для регенерации костной

Экс естественных Мимикрия нормального и аномального человека Кровотворение

Выделение мезенхимальных стволовых клеток человека и их культивировании на пористых Bone Matrix

Оптимизация пристрастие к мезенхимальных стволовых клеток человека на поли (ε-капролактон) Electrospun пряжи

Биоинжиниринг гуманизированных микроуровней костного мозга в мышах и их визуализация с помощью Live Imaging