Флуоресцентное мечение клеток глиомы: метод трансфекции на основе лентивирусного вектора для получения клеток глиомы, экспрессирующих флуоресцентный белок для визуализации глубоких тканей

Визуализация рака мозга in vivo включает в себя введение флуоресцентно меченых раковых клеток в мозг мыши для наблюдения за развитием опухоли. Для флуоресцентного мечения инкубируйте клетки глиомы с частицами лентивируса. Лентивирусный вектор несет ген инфракрасного флуоресцентного белка iRFP.

Вирус связывается с поверхностью клетки глиомы и высвобождает РНК в клетку. Клеточные ферменты преобразуют вирусную РНК в двухцепочечную ДНК, которая интегрируется в клеточный геном и обеспечивает экспрессию iRFP. Максимумы возбуждения и излучения iRFP находятся в ближней инфракрасной области, где ткани имеют минимальное поглощение и рассеяние. Это позволяет точно визуализировать глубокие ткани.

Далее удаляем отработанное среднее и добавляем трипсин. Трипсин, фермент протеаза, переваривает адгезионные белки, отделяя клетки от поверхности колбы. Многократно пипетка, чтобы разделить отдельные клетки. Соберите клеточную суспензию в пробирку и центрифугу. Теперь добавьте подходящий буфер для ресуспендирования гранулы.

Дозируйте клеточную суспензию в пробирки проточной цитометрии и окрашивайте клетки флуоресцентным красителем DAPI. DAPI окрашивает ядра мертвых клеток в ярко-синий цвет, отличая их