Внутриутробная электропорация на основе доставки генов: метод введения плазмидной ДНК в эмбриональные клетки мозжечка мышиных эмбрионов

Начните с того, что возьмите беременную мышь под наркозом в положение лежа на спине. Подготовьте мышь, удалив волосы в области живота. Разрежьте кожу и нижележащие мышечные слои, чтобы обнажить рога матки - места, где находятся жизнеспособные эмбрионы.

Теперь вытяните рога матки из брюшной полости. Возьмите острый наконечник стеклянного капилляра, содержащего нужный раствор плазмиды ДНК. Найдите мозг эмбриона и введите раствор плазмидной ДНК через стенку матки в четвертый желудочек. Это положение находится перед мозжечковым зачатком - желаемым местом для возможной доставки ДНК.

После инъекции втяните пустой капилляр. Затем, для электропорации ДНК введенного эмбриона, расположите два электрода над стенкой матки таким образом, чтобы положительный электрод покрывал зачаток мозжечка, а отрицательный — область вокруг ушей.

Применяйте электрические импульсы в течение нужной длительности. Эти импульсы делают нейронные клетки мозжечка проницаемыми, позволяя плазмидной ДНК проникать в клетки-мишени. Наконец, поместите рога матки обратно в брюшную полость в их естественное положение. Зашите порезы, перенесите мышь в клетку и дайте ей восстановиться.

Начните с загрузки капилляра из боросилика