Модель периневральной инвазии мыши: создание модели in vivo для моделирования периневральной инвазии в седалищном нерве мыши

Периневральная инвазия — это редкое метастатическое явление, при котором раковые клетки метастазируют вдали от места возникновения, чтобы проникнуть в периневральное пространство внутри нервов. Микроокружение нервов обеспечивает подходящую среду для роста и пролиферации рака.

Чтобы смоделировать периневральную инвазию in vivo, подготовьте мышь под наркозом в положении лежа. Сделайте небольшой, параллельный разрез ниже бедренной кости – бедренной кости. Разделите мышцы бедра, чтобы выявить нижележащий седалищный нерв - самый большой и легкодоступный нерв в организме.

Седалищный нерв берет начало в нижней части позвоночника и проходит через мышцы таза к каждой ноге. Он передает сигналы для скоординированного движения нижних конечностей. Далее удалите окружающие мышцы из нерва и вытяните его наружу с помощью стерилизованного шпателя для инъекционной поддержки.

Теперь возьмите шприц, наполненный суспензией раковых клеток, и введите его параллельно в нерв. Видимая выпуклость в нерве подтверждает успешную инъекцию, в то время как любая утечка вокруг места инъекции указывает на неудачную попытку. Вкратце, позвольте клеткам стабилизироваться внутри нерва.

Затем аккуратно втяните иглу и переместите мышцы. Впоследствии зашить разрез. Дайте мыши восстановиться. В конце концов, раковые клетки начинают мигрировать от места инъекции к спинному мозгу, подтверждая периневральную инвазию.

За день до операции удалите шерсть по длине бедренной кости у 8-недельного самца или самки мышей C57BL/6J в возрасте 8 недель с помощью хирургической машинки для стрижки или химического средства для удаления волос. В день операции продезинфицируйте стадию, обезболите мышей с помощью 2% изофлурана в индукционной камере и нанесите ветеринарную мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость под анестезией.

Введите подкожно необходимое по весу количество анальгетика и перенесите мышь к носовому конусу в области операции. Тепловая поддержка обеспечивается на протяжении всей хирургической процедуры. Поместите мышь под наркозом на ее брюшную сторону и аккуратно закрепите каждую конечность гипоаллергенной лентой, чтобы создать легкое напряжение в конечности, которую нужно ввести.

Очистите место инъекции тампоном с бетадином, затем снова 70% спиртом. Повторите этот процесс еще два раза и убедитесь, что на операционном поле не осталось выпавших волос. В качестве заключительного шага нанесите раствор бетадина на операционную область. Надев стерильные перчатки и надев стерильную простыню, используйте специальный стерильный инструмент, чтобы зажать палец ноги, прежде чем делать разрез под простыней.

Затем с помощью стерильных маленьких ножниц сделайте 1-сантиметровый разрез примерно на 2 миллиметра ниже и параллельно бедренной кости. Втяните кожу щипцами в сторону, чтобы обнажить мышцы под ней. Разделите большую ягодичную мышцу и двуглавую мышцу бедра вдоль фасциальной плоскости и обнажите седалищный нерв под ней. Освободите нерв от окружающих мышц с помощью тупого рассечения.

Наберите 3 микролитра раковых клеток из гранулы в стерильный 10-микролитровый шприц. Поместите небольшой металлический шпатель под нерв в месте инъекции для поддержки. Во время визуализации с помощью препарирующего микроскопа держите иглу параллельно нерву и введите ее в нерв. Будьте осторожны, чтобы не проколоть заднюю часть нерва.

Медленно вводите клетки в нерв в течение 5 секунд. Образование луковицы в области инъекции свидетельствует о хорошей инъекции. Оставьте иглу на месте на 3 секунды, чтобы свести к минимуму обратный поток, прежде чем аккуратно извлечь иглу. Правильное введение раковых клеток в седалищный нерв имеет решающее значение. Если клетки вводятся за пределы нерва, пострадает консистенция инвазии. Однако, с практикой и опытом, это большая редкость.

После инъекции верните нерв в исходное положение и накройте нерв вышележащими мышцами. Обработайте мышей правильным обезболиванием, а затем закройте кожу нейлоновыми швами 5-0. Поместите мышь одну в чистую клетку для наблюдения и обеспечьте тепловую поддержку во время восстановления, пока она не придет в сознание, достаточное для поддержания лежачего положения на грудине.