Мышиная модель метастазирования в мозг: метод создания мышиной модели метастазирования в мозг путем инъекции раковых клеток в сонную артерию

При метастазировании в головной мозг раковые клетки из других пораженных органов или первичного места происхождения распространяются в центральную нервную систему, образуя вторичные опухоли. Чтобы создать модель метастазирования в мозг мыши, подготовьте мышь под наркозом в лежачем положении. Сделайте небольшой разрез в области шеи.

Рассеките мышцы, чтобы обнажить одну из нижележащих сонных артерий. Сонные артерии — это пара крупных кровеносных сосудов в области шеи, снабжающих кровью мозг и голову. Отделите сонную артерию от прилегающего блуждающего нерва. Затем наложите шовные узлы вокруг проксимального и дистального концов артерии.

Затяните проксимальный узел, чтобы затруднить приток крови к целевому месту инъекции. Затем поместите пропитанный буфером ватный тампон под целевое место инъекции, чтобы обездвижить и растянуть артерию для дополнительной поддержки. Возьмите шприц, наполненный зеленым флуоресцентным белком или суспензией раковых клеток, меченой GFP.

Аккуратно введите клеточную суспензию в просвет сонной артерии. Втяните иглу и затяните дистальный узел, чтобы предотвратить утечку раковых клеток. Наконец, зашите разрез. Дайте мыши восстановиться. Со временем раковые клетки начинают мигрировать и образовывать вторичные опухоли в головном мозге, подтверждая успешное установление модели метастазирования в мозг.

Во время этой процедуры обезболивайте мышь коктейлем кетамин/ксилазин путем внутрибрюшинного введения. Подтвердите полную анестезию, ущипнув животное за ноги и наблюдайте за отсутствием реакции. Далее удалите волосы на шее с помощью бритья или с помощью небольшого количества средства для удаления волос.

Затем поместите мышь на стеклянную пластину и закрепите резинками. Очистите кожу, нанеся 70% спирт и повидон-йод. Теперь сделайте разрез на коже длиной около 1 сантиметра хирургическим скальпелем. Затем тупо рассеките мышцу хирургическими щипцами, чтобы обнажить сонную артерию под ней.

Отделите сонную артерию от соседнего блуждающего нерва с помощью хирургических щипцов. После этого наложите два шва - один дистальный, а другой проксимальнее ватного тампона - и завяжите свободные узлы. Затяните проксимальный узел, чтобы перекрыть приток крови к месту инъекции.

После этого смочите небольшой ватный тампон с буфером и поместите его под сонную артерию предполагаемого места инъекции. Затем приступайте к инъекции раковых клеток, если сонная артерия на ватном шарике оказывается полностью заполненной свежей красной кровью.

На этом этапе сделайте вортекс и наберите в шприц 100 микролитров раковых клеток. Под рассекающий микроскоп медленно введите иглу 31 калибра скосом вверх в просвет сонной артерии, расположенной сверху ватного тампона. Медленно вводите клетки из шприца в сонную артерию.

Успешная инъекция может наблюдаться по изменению цвета близлежащих кровеносных сосудов и мускулатуры, когда буферные раковые клетки проталкиваются в кровоток. Когда инъекция будет завершена, осторожно приподнимите дистальный отдел, чтобы предотвратить регургитацию. Затем быстро затяните дистальный узел, чтобы завершить процесс инъекции.

После завершения инъекции затяните лигатуры и обрежьте микроножницами излишки шелкового шва. Отодвиньте отделенную мышцу назад, чтобы покрыть место раны, и закройте кожу двумя скобами.

Для восстановления переложите животное на грелку. Затем введите бупренорфин подкожно в качестве послеоперационной анальгезии. Как только она придет в сознание и вернется к нормальному поведению, верните мышь на место ее обитания. Обеспечьте животное гелевым кормом в течение нескольких дней после операции.