Долгосрочная ортотопическая трансплантация опухолевых клеток эмбрионам рыбок данио: эффективный метод доставки опухолевых клеток в четвертый желудочек эмбрионов рыбок данио для долгосрочного анализа поведения опухолевых клеток

Во время ортотопической трансплантации опухолевые клетки или ткань от опухолевого донора пересаживаются в соответствующую ткань реципиента того же вида. Во-первых, приготовьте однородную суспензию - в подходящем буфере - флуоресцентно меченых опухолевых клеток головного мозга, собранных у рыбок данио-рерио, несущих опухоль. С помощью тонкого гелевого наконечника загрузите эту суспензию в иглу для микроинъекций.

Далее закрепите заряженную иглу в держателе микроманипулятора. Впоследствии перенесите эмбрион данио-рерио, находящегося под наркозом, в сборную инъекционную пластину. Для легкого доступа во время микроинъекции расположите эмбрион латерально, чтобы визуализировать желудочки мозга — сеть заполненных спинномозговой жидкостью полостей в мозге.

Отрегулируйте кончик иглы для введения суспензии опухолевых клеток в четвертый желудочек, ромбовидную полость заднего мозга эмбриона. Опухолевые клетки занимают полое пространство в желудочке. Втяните иглу. Перенесите эмбрион в чашку для культивирования, содержащую физиологический раствор. Наблюдайте за эмбрионом под флуоресцентным стереомикроскопом, чтобы подтвердить наличие опухолевых клеток в пространстве желудочка.

Инкубируйте эмбрион