Генерация микроопухолей: метод культивирования in vitro для культивирования 3D-микроопухолей для анализа реакции на медикаментозное лечение

Микроопухоли – трехмерные агрегаты опухолевых клеток in vitro – близко имитируют микроокружение опухоли in vivo и служат перспективными платформами для оценки эффективности лекарственных препаратов. Чтобы создать микроопухоли, начните с равномерной суспензии опухолевых клеток, полученных от пациента.

Затем разбавьте клеточную суспензию желаемым объемом охлажденного внеклеточного матрикса или ВКМ человеческого происхождения. Пипетируйте небольшие объемы этой клеточно-матричной смеси на специальную металлическую пластину, содержащую штифты с гидрофобным покрытием. Гидрофобное покрытие на штифтах позволяет каплям сохранять свою сферическую форму.

Инкубируйте для облегчения гелеобразования ВКМ, встраивая клетки внутрь. Теперь перенесите внедренные в клетки гелевые шарики на культуральную пластину большого объема, содержащую подходящую среду. Инкубируйте в течение желаемой продолжительности. В культуре инкапсулированные клетки начинают агрегировать внутри матрицы ECM, которая обеспечивает среду для нестимулированного роста клеток.

Кроме того, компоненты среды диффундируют через матрикс и способствуют пролиферации клеток, способствуя образованию трехмерных микроопухолей внутри гранул. За