Индукция глиобластомы с использованием SB-опосредованной транспозиции: метод создания новой модели мыши с использованием транспозон-опосредованной интеграции SB-плазмиды в мозг неонатальной мыши

Начните с приема пробирки, содержащей смесь плазмид. Плазмида транспозона «спящая красавица» или транспозона SB спроектирована таким образом, чтобы нести переносимый элемент, содержащий онкоген человеческого происхождения, вызывающий глиобластому, зажатый между двумя инвертированными повторяющимися последовательностями. Кроме того, эта смесь содержит плазмиду транспозазы SB, которая содержит элемент, экспрессирующий фермент транспозазу.

Теперь добавьте в пробирку подходящий реагент для трансфекции. Аспирируйте инъекционную смесь в шприц, оснащенный микроиглой. Затем закрепите щенка мыши, находящегося под наркозом, в положении лежа на стереотаксической раме. Визуализируйте область головы щенка, чтобы найти черепные швы. Расположите микроиглу над черепными швами.

Введите смесь в боковой желудочек - полость внутри паренхимы мозга. Впоследствии раствор диспергируется в паренхиме головного мозга, где молекулы трансфекционного реагента облегчают проникновение плазмид внутрь клеток. Оказавшись внутри клетки, плазмида транспозазы экспрессирует молекулы фермента транспозазы, которые распознают инвертированные повторяющиеся последовательности и вырезают элемент транспозона.

Затем перемещаемы