Изоляция сосудов мозга мыши: протокол выделения неповрежденных сосудов из образца мозга мыши

Сосуды головного мозга окружены слоем плотно связанных между собой эндотелиальных клеток. Эти клетки имеют базальную мембрану вокруг себя вместе с клеточными компонентами, такими как перициты и астроциты.

Чтобы изолировать сосуды мозга от окружающих нейронов и глиальных клеток, возьмите стакан, содержащий мозг мыши, погруженный в гомогенизационный буфер. Пропустите через мясорубку на мелкие кусочки. Гомогенизируйте мозговую ткань, чтобы диссоциировать ее, высвобождая нейроны, глиальные клетки и сосуды мозга. Это лечение также разрушает миелиновую оболочку, окружающую нейроны.

Переложите гомогенат в пробирку и центрифугуйте для гранулирования сосудов. Более легкие компоненты, такие как нейроны и глиальные клетки, остаются в надосадочной жидкости, в то время как миелин образует плотный интерфейсный слой, окружающий гранулу.

Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу сосуда с прикрепленным слоем миелина в подходящую среду с градиентом плотности. Центрифуга для гранулирования сосудов и получения полосы богатого жирами миелина, плавающей в верхней части надосадочной жидкости. Удалите миелиновую ленту вместе с отработанной средой и снова суспендируйте гранулу в свеж