Анализ фагоцитоза in vitro: метод на основе визуализации в реальном времени для изучения фагоцитоза синаптосомы астроцитов, опосредованного астроцитами

Синаптосомы представляют собой изолированные нейронные фракции, богатые синаптическими везикулами. Эти синаптосомы поглощаются астроцитами — популяцией иммунных клеток в мозге — в результате процесса, известного как фагоцитоз.

Для изучения астроцитарно-опосредованного фагоцитоза in vitro начните с взятия культурального планшета, содержащего монослой астроцитов. Теперь добавьте в пластину суспензию конъюгированной синаптосомы с индикатором pH. Этот индикаторный краситель обладает свойством флуоресцировать исключительно при низком pH. Инкубируйте тарелку в течение желаемого времени.

Во время инкубации фосфатидилсерин или ФС, присутствующий на внешней мембране синаптосомы, позволяет ему связываться с соответствующими рецепторами ФС на мембране астроцитов. Это способствует расселению синаптосом в основании. Отсасывайте отработанную среду вместе с несвязанными синаптосомами из пластины.

Далее дополните тарелку факторами, способствующими фагоцитозу, и инкубируйте. Затем визуализируйте пластину с помощью флуоресцентного микроскопа. Связываясь с поверхностью, астроциты поглощают синаптосомы, заставляя их проникать в фагосомы. Попадая внутрь фагосом, низкий pH заставляет молекулы индикаторн