Ex vivo электропорация срезов мозжечка куриного эмбриона: метод введения плазмидной ДНК, кодирующей зеленый флуоресцентный белок, для визуализации зернистого развития клеток

Гранулярные клетки мозжечка являются наиболее распространенным типом нейронов мозга. Внешний зернистый слой, EGL, состоит исключительно из гранулярных клеточных предшественников, GCP, которые дифференцируются и мигрируют внутрь, образуя внутренний зернистый слой, IGL.

Чтобы визуализировать развитие зернистых ячеек, подготовьте камеру электропорации, прикрепив анод к основанию чашки Петри. Добавьте питательную среду, чтобы покрыть электрод. Теперь поместите культуральную вставку на электрод, покрытый средой. Перенесите срезы мозжечка куриного эмбриона на культуральную вставку в сагиттальной ориентации.

Сагиттальная плоскость позволяет идентифицировать целевой слой-EGL на фоне различных слоев мозжечка. Добавьте вязкий раствор красителя, содержащий плазмидную ДНК GFP, поверх EGL. Плазмидная ДНК GFP кодирует зеленый флуоресцентный белок, который равномерно распределяется в цитоплазме клетки и позволяет визуализировать живые клетки.

Затем поместите катод в среду рядом с EGL, но не непосредственно на ткань. Затем подайте несколько электрических импульсов на разные области EGL. Электрические импульсы индуцируют временные поры в клеточной мембране, позволяя клеткам поглощать плазмидную ДНК