Электропорация одиночных клеток в органотипических культурах срезов мозга: метод in vitro для доставки плазмид внутрь целевых нейронов в срезах гиппокампа мозга

Начните электропорацию с взятия стеклянной пипетки, содержащей нужный раствор плазмиды. Прикрепите его к держателю для микропипетки с электродом из серебряной проволоки, убедившись, что электрод вставлен в микропипетку. Возьмем камеру для электропорации, содержащую ультратонкий участок гиппокампа, погруженный в искусственную спинномозговую жидкость.

Опустите заземляющий электрод в жидкость, присутствующую в камере, для последующей электропорации. Опустите наконечник пипетки в камеру электропорации и запишите базовое сопротивление. С помощью микроскопа расположите наконечник пипетки рядом с целевой клеткой. Как только пипетка вступает в контакт с мембраной нейрона, ее сопротивление резко возрастает.

Приложите положительное давление воздуха, чтобы создать небольшую инвагинацию в мембране нейронов. Быстро нанесите мягкое всасывание, чтобы протолкнуть мембрану вверх, создав неплотное уплотнение между наконечником пипетки и мембраной. Повторите этот процесс еще несколько раз, чтобы кондиционировать мембрану и избежать лизиса клеток.

После кондиционирования примените сильное всасывание, чтобы сформировать плотное уплотнение с мембраной, называемой гигаомным уплотнением. С помощью электри